5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液(DTT)
5×双色蛋白上样缓冲液,含SDS与DTT,变性还原蛋白并追踪电泳与转膜。
产品货号:ED-8522
浓度:5×
货期:现货
包装单位:瓶
ED-8522 5×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液(DTT)由DingZ BIO提供,瓶装规格,现货供应。属于上样及电泳类生物科研试剂,品质稳定可靠,适用于科研院所与生物医药企业,快速交付。
配方组成
| 成分 | 终浓度 |
|---|---|
| Tris-HCl | 312 mM |
| SDS | 10 %(w/v) |
| 甘油 | 50 %(v/v) |
| 溴酚蓝(钠盐) | 0.5 %(w/v) |
| DTT | 0.5 M |
浓度为成品中的终浓度。需要不同浓度、pH 或规格,可点上方「基于此产品定制」。
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保存条件
-20℃保存,有效期12个月
概述
本产品为5倍浓缩的蛋白电泳专用上样缓冲液,含有高纯度SDS和强还原剂DTT,旨在彻底消除蛋白质间的结构与电荷差异,保护蛋白质免受热降解,并维持电泳过程中的 pH 环境稳定。
变性机制:
1. SDS (十二烷基硫酸钠):破坏蛋白二级、三级结构,使其带上高密度负电荷,消除电荷差异。
2. DTT (二硫苏糖醇):有效还原并断开蛋白质分子内及分子间的二硫键,实现亚单位的彻底分离。
双色追踪系统:
1. 蓝色 (溴酚蓝, Bromophenol Blue):常规电泳指示前沿,用于追踪样品运行位置。
2. 粉红色 (派洛宁 Y, Pyronin Y):具有更快的迁移特性,特别适用于监测 Western Blot 转膜过程中蛋白质向膜(NC/PVDF)的转移情况。
使用方法
1. 溶解:室温或37°C水浴解冻并充分混匀。
2. 混合:将样品与5×上样缓冲液按4:1 的比例混合(例如:40 μL蛋白样品加入10 μL缓冲液)。若样品浓度过高,可用ddH2O预稀释。
3. 变性:混合后,95-100°C加热5–10分钟。
4. 离心:冷却至室温,以 10,000–14,000 rpm 离心 2–5 分钟,取上清液即可进行电泳。
指示剂迁移参考
凝胶浓度 (%) | 溴酚蓝 (蓝色) 近似位置 | 派洛宁 Y (粉红色) 相对位置 |
8% | ~30 kDa | 迁移最快,位于前端 |
12% | ~20 kDa | 位于溴酚蓝下方 |
15% | ~10 kDa | 派洛宁Y迁移可能慢于溴酚蓝 |
注:在经典Tris-Glycine电泳体系(SDS-PAGE)中,两种染料的迁移位置随凝胶浓度的变化规律如上
注意事项
1. 溶解预警:-20°C下SDS可能会析出。使用前请务必确认溶液完全清亮。若有沉淀,可通过37°C水浴促溶并摇匀。
2. 颜色变化:受DTT及温度影响,冻存状态下溶液可能呈现深棕色,复温溶解后会恢复正常,不影响实验结果。
3. 上样量控制:加样量过多可能导致条带拖尾或跑样不齐;加样不足则可能导致信号微弱。
4. 示踪染料偏差:由于不同厂家生产的预制胶或配制缓冲液的离子强度差异,染料的绝对迁移位置可能存在±5 kDa的波动。
5. 操作规范:必须在通风处操作,穿实验服并戴一次性手套。