10×流式破膜缓冲液(Saponin)（破膜剂） 100ml

保存条件

4ºC避光保存（请勿冷冻），有效期12个月

概述

本产品专门用于流式细胞术中胞内抗原检测的破膜处理。

作用机制：Saponin (皂苷) 是一种非离子型表面活性剂，能与细胞膜上的胆固醇特异性结合，诱导形成跨膜小孔（直径约8-10 nm）。

产品特点：

1. 温和性：相比 Triton X-100 等强力去垢剂，Saponin 对细胞形态（FSC/SSC）的影响较小，能较好地保护抗原表位。

2. 可逆性：Saponin 的破膜作用是可逆的。必须在整个染色和洗涤步骤中始终保持破膜剂的存在，否则胞内孔道会闭合，导致抗体无法洗出或结合。

操作方法】
以下流程以检测胞内细胞因子为例，仅供参考：

1. 使用前稀释（关键）：10×母液请按1:9比例使用去离子水稀释（如100 mL母液+ 900 mL纯水）。（注：货号ED-8648为1×即用型，无需稀释）。

2. 细胞收集：收获待测细胞（约1×10⁶个），4°C、300–500 g (约1000–1500 rpm) 离心5分钟，弃上清。

3. 固定：加入500 μL预冷的固定液（推荐ED-9028 流式固定液），室温孵育10–20分钟。注：必须先固定后破膜，以锁定胞内蛋白质结构。

4. 洗涤：离心后弃上清，加入1 mL PBS 洗涤一次。

5. 破膜：弃上清，加入1.5 mL 1×流式破膜缓冲液 (Saponin)，室温孵育15分钟。

6. 离心：300–500 g 离心5分钟，弃上清。

7. 抗体孵育：使用100 μL 1×流式破膜缓冲液重悬细胞，加入荧光标记的检测抗体，避光孵育30分钟。专业提示：此步必须使用破膜液而非普通 PBS，以维持膜孔开启状态。

8. 洗涤与上机：加入1–2 mL破膜液洗涤一次，离心弃上清后，用500 μL流式染色缓冲液（或PBS）重悬，立即上机分析。

【注意事项

1. 维持破膜状态：Saponin的破膜效应在去除药剂后会消失。因此，从破膜开始到染色结束的所有洗涤和稀释步骤，均应使用本破膜缓冲液。

2. 防止挥发：表面活性剂溶液易产生气泡或挥发，用后请及时拧紧瓶盖。

3. 安全防护：仅限科研使用。操作时请穿实验服、戴一次性手套，避免接触皮肤和眼睛。