中性红染色液(无菌，0.33%）

保存条件

4℃避光保存，有效期12个月

概述

中性红（Neutral Red）是一种弱碱性pH指示剂（变色范围 pH 6.8-8.0，由红变黄）。

活细胞染色：中性红能穿透细胞膜并在酸性的溶酶体中蓄积，将其染成鲜红色，常用于细胞生活力鉴定及毒性试验。

固定样本染色：细胞固定后，其酸性环境被破坏，中性红转而与细胞核内的 DNA/RNA 结合，使细胞核呈现深红色，胞浆呈现浅红色。

无菌保证：本品经 0.22μm微孔滤膜过滤除菌，可直接用于细胞培养相关的无菌操作。

使用建议

应用方案A：活细胞溶酶体摄取实验 (NRU Assay)

1. 铺板与处理：在96孔板中培养细胞并进行药物处理。

2. 孵育：移除培养基，加入含10%中性红染色液的培养基（即中性红稀释至0.033%）。

3. 摄取：在37°C、5% CO₂培养箱中孵育2-3小时。

4. 洗涤与观察：弃去染色液，用预冷的PBS洗涤一次。活细胞溶酶体呈现清晰的红色颗粒。

应用方案 B：组织切片或固定细胞的复染

1. 样本脱蜡/固定：
石蜡切片：经二甲苯脱蜡、梯度乙醇降级复水至蒸馏水。
细胞爬片：使用适当固定液（如ES-8100 4％组织/细胞固定液）固定 15 min，蒸馏水洗涤。

2. 染色：滴加中性红染色液，室温避光染色10-30分钟。
注：作为复染（如配合大肠杆菌染色或碱性磷酸酶染色）时，时间建议控制在2-5分钟。

3. 分化与洗涤：蒸馏水快速冲洗。若染色过深，可用95%乙醇稍作分化。

4. 封片：湿片可直接观察。永久封片：需经无水乙醇极速脱水（因中性红极易溶于乙醇），二甲苯透明，中性树胶封片。

注意事项

1. pH环境敏感性：洗涤水的pH值直接影响显色。若颜色偏橙黄，说明环境偏碱，可改用微酸性水（加极少量醋酸）洗涤以恢复鲜红色。

2. 防止褪色：中性红是非永久性染料，在阳光直射下易褪色，观察及保存过程请注意避光。

3. 安全性：虽然本品经过滤除菌，但仍具有一定生物毒性，操作时请穿戴标准防护装备（手套/口罩/实验服）。

科研声明：本试剂仅供科学研究使用，严禁用于临床医疗、诊断或食品添加。